2000年，出演电视剧及舞台剧《男亲女爱》，饰梅日仙。 2001年，与陈浩民、叶璇搭档主演神话剧《封神榜》，饰殷十娘。 2005年，在电视处境喜剧《窈窕熟女》中饰李真真。 2006年9月，出演现代轻喜剧《高朋满座》，饰高丽。 2007年8月，在方中信主演的《建筑有情天》中苑琼丹出演钟国美一角。 2009年3月，出演了王晶执导的古装喜剧《大内密探灵灵狗》，饰林美人；4月，主演由邝业生执导的古装轻喜剧《刁蛮娇妻苏小妹》，出演柳月娥一角；10月，出演贺岁喜剧《财神到》。 2010年1月，出演古装轻喜剧《欢喜婆婆俏媳妇》，饰演光绪皇帝的表姐“马玲珑”；4月，在导演王宁执导并编剧的爱情喜剧电影《爱情维修站》中饰张燕；5月，参与陈锦鸿主演的古装谐趣系列剧《妹仔大过主人婆》，苑琼丹扮演阿转；6月，主演清装涉案轻喜剧《审死官》，并扮演潘巧云；7月，出演时装电视剧《情越双白线》，并凭借陈笑芬一角获得了2010年TVB台庆最佳女配角的提名；9月，搭档郑则仕主演“80后”爱情励志剧《爱情可以有》，饰演傅阿姨；10月，参与秦子越、秦昊、徐娇主演的喜剧动作魔幻片《玩命时光》，饰婆婆；11月，主演年代剧《百媚千娇》，出演宋喜娘；同年，参与侦探查案剧《囧探查过界》的拍摄。 2011年3月29日，出演悬疑搞笑武打电视剧《七品芝麻官》，饰吴笑娥；4月14日，在青春惊悚电影《夜店诡谈》里特别客串护士长；8月7日，获得乐视影视盛典年度最具实力女演员获奖；7月13日，客串爱情情景喜剧《爱情公寓3》，在剧中饰演胡一菲的妈妈；8月，出演青春都市情感剧《亲爱的，回家》，饰安母。 2012年1月16日，出演都市情感戏《金玉满堂》，饰刘氏家族第二代传人叶霜；4月7日，在时尚探案剧《新神探联盟》中饰演宫洁；4月25日，参演原生态喜剧电影《左眼不跳财》饰母亲；10月12日，主演古装电视剧《紫钗奇缘》，饰宁国公主；10月23日，在于正执导的《宫锁沉香》中饰掌事姑姑；12月30日，与小沈阳、叶璇、胡静搭档主演都市婚恋求生指南《抓紧时间爱》。 2014年7月，苑琼丹在轻喜剧爱情电影《幸福从天而降》中饰老妈；同年出演网络电视剧《包笑公堂》，饰演苑皇后。 2015年与吴磊合作，出演网剧《仙剑客栈》饰演婶婶。参演古装动作喜剧《毛驴县令》，饰演县令夫人；同年出演由徐峥自导自演的电影《港囧》，饰演多佳丽·樱桃小丸子。 2016年8月，出演都市励志偶像剧《美味奇缘》；随后，拍摄了陈太源执导的动作电影《流金》（原《女神特工队》）；10月，与徐申东、元华、陈德容主演了美食爱情喜剧电影《泡菜爱上小龙虾》，饰演怪客龙虾店的房东十三娘；同年参演悬疑犯罪刑侦推理剧《见习法医》；同年参演电视剧《美味奇缘》，饰演吴素萍。 2017年3月，接拍了中神话魔幻电影《西游记之女儿国》；6月，与徐锦江、曾志伟参加《极限挑战3》的拍摄。 2018年12月，出演青春探案剧《少年包拯》，饰演包大娘。 2021年2月1日，出演的动作奇幻爱情电影《混世四猴：神猴归来》定档2月6日播出。 2021年9月2日，其出演的奇幻喜剧《雾都奇遇夜》在中山影视城举行开机仪式。
